مجله علمي سلول

38156-8- -1 دانشگاه اراك، دانشكده علوم، گروه زيست شناسي، كد پستي 8349

-2 دانش آموخته كارشناسي ارشد زيست شناسي تكويني، دانشگاه اراك، دانشكده علوم، گروه زيست شناسي

a-hamta@araku.ac.ir : * پست الكترونيك نويسنده مسئول

1390/8/ 1390 تاريخ پذيرش: 15 /4/ تاريخ دريافت: 14

روي سلول هاي سرطان پستان القا شده (Rosmarinus officinalis) هدف: مطالعه حاضر به بررسي اثرات سايتوتوكسيك گياه رزماري

پرداخته است. SD در رت هاي نژاد DMBA توسط

به رت هاي گروه تيمار خورانده شد. پس از ايجاد تومورها، جهت تعيين نوع تومور DMBA مواد و رو شها: 10 ميل يگرم از كارسينوژن

و بررسي هيستوپاتولوژيك، رنگ آميزي هماتوكسيلين- ائوزين صورت گرفت. جهت تهيه سلول از روش خرد كردن تومور استفاده شد . از

عصاره گيري شد. سپس عصاره فيلتر شده و مقداري از آن كنار گذاشته digestion برگ هاي خشك رزماري با استفاده از متانول به روش

و مابقي آن توسط حلال هاي غيرقطبي هگزان، دي كلرومتان و اتيل استات شستشو داده شد تا مواد غيرقطبي آن جدا شود . عمل حذف

حلال با استفاده از دستگاه تبخيركننده چرخشي انجام گرفت. از تاكسول و هريك از عصار هها 5 غلظت تهيه شده و بر روي سلول ها

ارزيابي شد. MTT اثر داده شد و توانايي زيستي سلول ها به دو روش جذب تريپان بلو و رنگ سنجي

نتايج: عصاره ي الكلي رزماري و تاكسول برروي سلو لهاي سرطاني داراي اثرات سمي قابل توجهي بودند ولي عصاره آبي خواص

ضدسرطاني بسيار ضعيفي داشت.

نتيجه گيري: عصاره الكلي رزماي به صورت وابسته به دز قادر به از بين بردن سلول هاي سرطاني بوده و خواص سايتوتوكسيك آن قابل

مقايسه با داروي تاكسول است. همچنين مدل سرطان پستان القايي يك مدل مناسب براي انجام آزمايشاتي از اين دست مي باشد.

DMBA ، واژگان كليدي: تاكسول، تومورهاي پستان، زيستايي سلول ها، عصاره رزماري

شمار م يرود و دومين سرطان كشنده پس از سرطان ريه است .

زنان در كشور مربوط به سرطان پستان مي باش د ( 1). بالا بودن

ابداع روش هاي درماني مؤثرتر را آشكار مي سازد.

استفاده از نوع ي ماده ش يميايي به نام 7و 12 دي متيل

.( است كه به وفور در دود تنباكو يافت مي شود ( 2

استفاده مي شود. با اين حال وجود عواملي مانند تنوع

را روشن مي سازد. اين in vitro drug sensitivity/resistance

فراهم كنند. به عبارت د يگر اي ن روش به in vivo آزمايشات

شيمي درماني بيماران برگزينند . همچن ين از اي ن روش بر اي

.( سميت بالقوه داروهاي غير مؤثر استفاده مي شود ( 3

كه قابليت كاهش مي زان (phytochemicals) مواد گياشيميايي

تقريباً غيرسمي مي باشند مورد توجه خاصي قرار دارند . با اين

است ( 3). تا به امروز مشخص شده كه بس ياري از گياهان راي ج

مي باشند، از جمله اين گياهان مي توان به (chemoprotective)

س ير و پي از و موس ير)، اعض اي خانواده ) Allium اعضاي گونه

نعناعيان (ريحان ، نعناع، آو يشن و رزمار ي)، اعض اي خانواده

زنجبيل و زردچوبه) اشاره نمود. اي ن گياهان ) Zingiberaceae

فيتواسترول ها، فلاونوئيدها، كاروتنوئيدها، ترپنوئيدها و ...

با DNA adducts ايمني بدن م ي شوند و همچن ين تشك يل

.( مرتبط با گسترش سرطان را مهار مي كنند ( 4

بالايي دارد. اما چيزي كه به تازگي و در يكي دو دهه اخير مورد

كارسينوژنيك آن م ي باشد . از آنجا كه سرطان يك بيماري

محققان بوده است . در اين پژوهش از مدل موش صحرايي

مطالعه اثر داروهاي ضدسرطان به شمار آيد. با بررسي داده هاي

آبي (فاقد عوامل غيرقطبي) رزماري قادر به از بين بردن

Sprague براي انجام اين پژوهش ر تهاي ماده ي بالغ از نژاد

150 گرم ) از موسسه ي سرم ± با ميانگين وزني ( 10 dawley

سازي رازي خريداري شده و در شرايط 12 ساعت تاريكي و 12

22 درجه ي سانتي گراد و ± ساعت روشنايي و حرارت 3

حيوانات نگهداري شوند.

دوز دارو و روش تيمار: حيوانات به 3 گروه تقسيم شده و به

به عنوان گروه كنترل 1 ميلي ليتر روغن (n= گروه اول ( 10

به عنوان گروه تيمار 1 ميلي ليتر (n= كنجد به گروه دوم ( 10

آلمان ) كه در 1 ،Sigma) DMBA محلول حاوي 10 ميلي گرم

،(n= ميلي ليتر روغن كنجد حل شده بود و به گروه آخر ( 10

كه DMBA بعنوان گروه تيمار 2 محلول حاوي 20 ميلي گرم

در 1 ميلي ليتر روغن كنجد حل شده بود بوسيله گاواژ داده شد .

اين دارو 2 بار در طول 2 هفته و در روز مشخص به گروه تيمار

خورانده شد. پس از پايان دوره تيمار و رسيدن تومور به اندازه

منتقل شد (شكل 1). يك سوم تومور به منظور تهيه مقاطع

بافتي، براي مطالعه پاتولوژيك در فرمالين 10 درصد قرار داده شد

و دو سوم باقيمانده جهت كشت سلول مورد استفاده قرار گرفت.

1385/5/28 ( مطابق با پروتكل هلسينكي 1975 ) در اين

پژوهش رعايت شد.

مطالعه هيستوپاتولوژيكي: نمونه به دست آمده از تومور به

مدت 48 تا 72 ساعت در فرمالين 10 درصد قرار داده شد و در

ادامه مراحل پاساژ بافتي (به اختصار آبگيري با درجات صعودي

الكل، شفاف سازي با زايلين و قال ب گيري در پارافين مذاب ) بر

روي قطعات تومور انجام گرفت. سپس با استفاده از ميكروتوم

از قالب ها برش هايي به ضخامت 3 ميكرومتر (Leitz 1512)

تهيه شده و رنگ آميزي هماتوكسيلين - ائوزين روي بر ش ها

انجام گرفت. در نهايت لا مها با ميكروسكوپ نوري مجهز به

دوربين مورد مطالعه و عكس برداري قرار گرفتند.

DMBA شكل 1: تومور خارج شده از رت تيمار شده با

تهيه سلو لهاي منفرد از بافت تومو ر: براي تهيه سلول از

از قسم تهاي داخلي تر قطعاتي بريده و به فالكو نهاي حاوي 10

آلمان) استريل انتقال داده شد. پس ،Gibco) HBSS ميلي ليتر

و سوسپانسيون حاصله به (chopping) ذرات بسيار ريز خرد شد

1500 به مدت 5 دقيقه rpm فالكون منتقل شده و با دور

سانتريفوژ شد. پس از آن محلول رويي دور ريخته شد و به

،Gibco) DMEM رسوب ته فالكون 5 ميلي ليتر محيط كشت

آلمان) اضافه گشت. پس ،Gibco) FBS آلمان) حاوي 10 درصد

1 تا 2 ميلي ليتر از مخلوط همگن شده به / از پيپتاژ كردن، 5

منتقل شده و حجم محيط داخل فلاسك به 5 T فلاسك هاي 25

دار CO ميلي ليتر رسانده شد . سپس فلاسك به انكوباتور 2

آلمان ) با دماي 37 درجه سانتي گراد منتقل ،Memmert)

گرديد. پس از گذشت 24 ساعت محيط رويي فلاسك تخليه و 5

ميلي ليتر محيط كشت تازه به فلاسك افزوده گشت . تعويض

گرفت و اين كار تا پاساژ هفتم تكرار شد.

تهيه عصاره هاي گياه ي: حدود 2 كيلوگرم